支付宝一次是否可以转5万需要分不同的情况判断，比如支付宝账户之间转账使用余额付款时可以转5万；如果在转账时使用绑定的银行卡进行付款，这时可能不能转账5万，因为不同的银行对单笔转账的额度和每天转账的额度都有限制，具体以银行规定为准。
比如农业银行转账限额单笔2万、单日2万、单月无限额；建设银行转账限额单笔1万、单日1万、单月10万；交通银行转账限额单笔1万、单日1万、单月10万；招商银行转账限额单笔5万、单日5万、单月无限额。
如果用户把个人支付宝中的余额转账到个人银行卡，这时超过2万元的部分会收取一定的费用，一般按照超出金额的0.1%收取服务费，最低0.1元/笔。非实名账户无免费额度，每笔转账都会收取费用。
个人账户余额转到银行卡免费额度没有时，用户可以使用支付宝上的蚂蚁积分进行兑换，这样就可以获得免费的额度。还有就是从支付宝中的余额宝转账到银行卡是不会收费的，不过通过支付宝余额转到余额宝的不能转到银行卡。